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    如何避免PCR實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)污染,有哪些辦法

    發(fā)布時(shí)間: 2021-11-01  點(diǎn)擊次數(shù): 1458次
      PCR實(shí)驗(yàn)室又叫基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室,由于PCR檢測(cè)因其高靈敏度、快速、操作方便等優(yōu)勢(shì)已經(jīng)被廣泛應(yīng)用,不過(guò)正是由于它靈敏度*,極微量的污染源都有可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性,因此,如何避免以及處理實(shí)驗(yàn)室污染,對(duì)PCR人來(lái)說(shuō)是一門必修課。
      
      一、樣本間交叉污染:
      
      主要是在采(取)樣的過(guò)程中,由于取樣工具之間的交叉造成污染;或者在核酸提取的過(guò)程中,由于移液器、離心管等使用不當(dāng)導(dǎo)致的污染。
      
      二、PCR試劑的污染:
      
      主要是在PCR試劑配制過(guò)程中,由于移液器、容器、陰性對(duì)照及其它試劑被核酸模板或陽(yáng)性對(duì)照污染。
      
      三、克隆質(zhì)粒的污染:
      
      在PCR實(shí)驗(yàn)室操作中經(jīng)常會(huì)用到陽(yáng)性參考品,這些陽(yáng)性參考品大多數(shù)是由某些克隆質(zhì)粒制作而成,克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)濃度高,不小心使用很容易造成污染。
      
      四、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物污染
      
      這是PCR反應(yīng)中主要常見的污染問(wèn)題。因?yàn)镻CR產(chǎn)物拷貝量大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于PCR檢測(cè)數(shù)個(gè)拷貝的極限,所以極微量的PCR產(chǎn)物污染,就可造成假陽(yáng)性結(jié)果。還有一種容易忽視,可能造成PCR產(chǎn)物污染的形式是氣溶膠污染,在空氣與液體面摩擦?xí)r就可形成氣溶膠,據(jù)計(jì)算一個(gè)氣溶膠顆??珊?.8萬(wàn)拷貝,因而由其造成的污染是一個(gè)值得特別重視的問(wèn)題。
      
      污染消除判斷標(biāo)準(zhǔn):
      
      設(shè)計(jì)陰性對(duì)照組,根據(jù)陰性對(duì)照確認(rèn)污染情況??墒褂贸ㄩ_后隔夜放置操作區(qū)的陰性對(duì)照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(在單獨(dú)的PCR實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證),若連續(xù)三天陰性對(duì)照沒有起跳,則說(shuō)明污染得到控制,可恢復(fù)正常實(shí)驗(yàn)。
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